微生物培养基的灭菌方法归纳

灭菌的方法，通常可以分为加热灭菌（包括直接灼烧灭菌、干热灭菌、加压蒸汽灭菌、间歇灭菌和煮沸消毒）、过滤去菌、射线灭菌和消毒、化学药剂灭菌和消毒四大类。下面具体讲解微生物培养基的灭菌步骤（/）。
 
l. 干热灭菌法（即热空气灭菌法）
干热灭菌一般是利用电热烘箱作为干热灭菌器。前面所包装好的玻璃器皿，如带棉塞的三角瓶，试管、包装好的吸管、培养皿等，放入电热烘箱中。
打开烘箱顶部的通气孔，接上电源加热，使箱内空气的温度达到160℃~170℃，关闭通气孔使箱内的温度保持在160℃左右并维持1.5-2h。时间一到，切断电源。待温度下降60℃~70℃以下，方可打开箱门取灭菌物品，否则骤冷后易使箱内玻璃仪器破损。
 
2. 加压蒸气灭菌法
利用高压灭菌器，使水的沸点在密闭的灭菌器内随压力升高而增高，来提高蒸汽的温度和灭菌的效率。
在同一温度下湿热的杀菌效率比干热大，因为微生物细胞蛋白质在湿热情况下，易干凝固。同时湿热的穿透力强，当水蒸汽与被灭菌的物品相接触后，便放出汽化潜热，逐步提高被灭菌物品的温度，直至与水蒸汽的温度相等，达到平衡为止，从而提高灭菌效率。
 
3. 间歇灭菌法（/）
常采用阿诺（Arnold）氏灭菌器和柯赫（Koch）氏灭菌器或蒸笼灭菌，常压条件下蒸汽温度不超过100℃。在没有高压灭菌器设备的情况下或不宜加压灭菌的物品，可采用此法灭菌。
方法是：待灭菌物品放在灭菌器或蒸笼里，每d蒸煮1次，每次煮沸lh，连续3d重复进行。在每两次蒸煮之间，将物品（指培养基）放在37C恒温条件下培养过夜，这样可以使每次蒸煮后未杀死的残留芽孢萌发成营养体，以便下1次蒸煮时杀灭。
 
4. 过滤除菌法
一些不能加热灭菌的液体物质（如维生素、血清），可以用过滤除菌法，一般用细菌过滤器进行除菌。
细菌过滤器中的过滤板常用陶瓷、硅藻土或石棉等做成，过滤板孔眼很小，细菌不能通过。因此，过滤后的液体就除去了细菌。在进行过滤除菌前，整个细菌过滤器和接受液体的器皿，必须要包装妥当并进行加压蒸汽灭菌后方可使用。
 
5. 紫外线灭菌（/）
波长260~280nm之间的紫外线有很强的杀菌能力，一般紫外灯管能产生253.7nm的紫外光，杀死力强而稳定，但穿透力弱一般只适宜物体表面、空气灭菌。例如接种室、培养室、手术室、药厂包装室等空气灭菌。一般30w灯管、9m3空间，距地面2m每次打开紫外线照射0.5h，就使室内空气灭菌。若照射紫外线时，先喷洒石碳酸等化学消毒剂，可增强灭菌效果。
在进行微生物接种和分离等操作时，常须用紫外线来杀灭接种室（箱）空气、台面等处的微生物。
紫外线虽有较强的杀菌力，但穿透力较弱，即使一薄层玻璃或水层就能将大部分紫外线滤除，因此只适用于空气及表面杀菌。
紫外线对眼粘膜及视神经有强烈的损伤作用，对皮肤有刺激作用，所以不能直接在紫外线灯开启下工作和用眼睛直视开启的紫外灯。
 
6. 化学药剂消毒灭菌
微生物实验室中常用的化学杀菌剂有升汞、甲醛、高锰酸钾、酒精、碘酒、龙胆紫、石炭酸、漂白粉、新洁尔灭、煤酚皂溶液，它们有的是杀菌剂，有的是抑菌剂。

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